定 价:49.8 元
丛书名:普通高等教育“十三五”规划教材 全国高等院校医学实验教学规划教材
- 作者:刘录山,龙石银主编
- 出版时间:2017/2/6
- ISBN:9787030509833
- 出 版 社:科学出版社
- 中图法分类:Q7-33
- 页码:
- 纸张:胶版纸
- 版次:1
- 开本:16K
《分子生物学实验》分为分子生物学实验技术及原理、分子生物学实验及分子生物学软件应用三篇。第二篇分子生物学实验内容包括DNA操作实验、RNA操作实验、蛋白质研究相关实验、基因表达与调节实验、转基因实验、细胞研究实验。各个实验章节的编排尽量按实验目的、实验原理、实验器材/试剂、实验步骤、实验结果、注意事项和思考题统一格式。《分子生物学实验》注重所述实验方法的常用性与先进性,同时注重语言的简洁性与条理性,以保证实验方法的可操作性。
《分子生物学实验》适用于高等医药院校基础、临床、预防和口腔医学等专业本科生,以及生物技术、生物科学、药学、医学检验、卫生检验和护理等专业本科生。同时可以作为生物医学专业研究生和从事生物医学研究的科技工作者的分子生物学实验参考用书。
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1865年孟德尔(Mendel)遗传因子假说的提出、1909年约翰逊(Johannsen)基因概念的引入、1944年艾弗里(Avery)DNA就是遗传物质的确定、1952年富兰克林(Franklin)DNA晶体X线衍射图谱的获得,加上沃森(Watson)与克里克(Crick)天才的想象力,1953年,DNA双螺旋结构模型被提出,从而开启了生命科学研究的又一里程碑,揭开了分子生物学——一门从生物大分子结构和功能水平上阐述生命现象及其本质新学科的序幕。如果说DNA双螺旋结构的提出只是分子生物学的萌芽,那么1958年遗传信息传递中心法则的提出、1972年DNA重组技术的建立、1983年PCR技术的发明、1998年RNA干扰现象的发现及技术体系的应用、2006年诱导多能干细胞的问世等一系列重大理论与技术发现,则持续催生使其蓬勃生长成今天生命科学学科中的参天大树,并还在以旺盛的生命力不断发展。
纵观分子生物学发展历程,理论与技术相辅相成,相互促进,如羽之双翼、车之双轮。今日分子生物学技术已经渗透到生命科学领域的各个学科,并且已经走进我们每一个平常人的日常生活,如各种转基因食品已经摆上了我们的餐桌,就医学而言,分子生物学技术已经贯穿于医学研究和临床疾病防治的各个环节。在医学研究领域,传统的整体和细胞水平研究已全面深入到分子水平研究。这可以从诺贝尔获奖者名单中得到证实,自20世纪60年代以来,诺贝尔生理学或医学奖中约有2/3的获奖是因为在分子生物学理论与技术方面取得重要突破,或是利用分子生物学技术在某些生物医学领域取得重要突破。这也可以从我国各类科学研究基金申请中得到证实,历年来生物医学方面获得资助的项目已经很少不涉及应用分子生物学技术。在疾病诊断方面,以PCR技术为主的基因诊断技术在遗传性疾病、感染性疾病和肿瘤性疾病等方面展示出广泛的应用前景。在疾病治疗方面,目前主要以各种病毒为载体的基因治疗取得了积极进展,并将有望从根本上根除某些疾病,如糖尿病等;利用基因工程技术生产的药用蛋白如人源性白蛋白将解决传统的血液提取来源不足的瓶颈。除此之外,还有基于分子生物学技术的感染性疾病病原微生物的追踪溯源,法医学人体标本的DNA检测、亲子鉴定。综上所述,在掌握分子生物学理论的同时,熟悉和掌握分子生物学技术对每一个医学生和医学工作者而言都是非常有必要的。但必须指出的是,任何科学技术都有可能是一把双刃剑,在我们合理应用分子生物学技术为人类健康带来福音的同时,也必须看到和考虑到滥用分子生物学技术的安全性问题和可能带来的伦理问题。
目前国内有关分子生物学理论的教材很多,介绍分子生物学实验技术的也有多种,但是尚缺乏可供医学院校本科生分子生物学实验技术教学的教材。我们在总结长期分子生物学实验教学经验的基础上,参考和借鉴已有的一些实验技术教学内容与方法,在既考虑本科生的水平与能力,侧重实用性和可操作性的同时,又考虑了分子生物学本身地发展,侧重先进性和科学性,选编了部分分子生物学实验技术,组织编写了这本教材。
本教材使用对象定位于高等医药院校基础、临床、预防和口腔医学等专业本科生,以及生物技术、生物科学、药学、医学检验、卫生检验和护理等专业本科生。同时可以作为生物医学专业研究生和从事生物医学研究的科技工作者分子生物学实验参考用书。
本教材的44位编委来自10所高等院校和科研院所,他们大部分来自医学院校,也有部分来自综合性大学的生命科学学院或生物工程学院。教材的整体设计过程得到了三位副主编的鼎力相助,各位编委结合自己的分子生物学实验教学经验尽心完成每一章的编写工作,同时也引用了部分国内外公开发表的文献和专著内容,以尽量提高编写质量,在此谨对原作者表示衷心感谢。南华大学生物化学与分子生物学教研室张敏博士担任本教材的编写秘书工作,为教材的最终完成做出了很大贡献。本教材的编写得到了科学出版社、南华大学医学部、南华大学医学院、南华大学心血管疾病研究所/动脉硬化学湖南省重点实验室和南华大学生物化学与分子生物学教研室、南华大学生物化学与分子生物学实验中心的大力支持,在此谨表衷心的感谢。还有一批为本教材编写工作作出贡献的人士在此一并表示衷心的感谢。
本教材虽然在编写过程中由编委分头执笔完成初稿后,进行了互审,后又进行了主编再审和编委定稿会终审,但是由于编者水平有限,加之分子生物学技术发展迅速,难免存在不足之处,敬请使用本教材的师生和科技工作者批评指正。
刘录山 龙石银
2016年12月
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目录
第一篇分子生物学实验技术及原理
第一章常用工具与方法1
第一节载体1
第二节常用工具酶9
第三节电泳14
第二章核酸操作技术21
第一节DNA的定性和定量分析21
第二节RNA的定性和定量分析30
第三节DNA重组技术40
第四节核酸文库构建44
第三章蛋白质研究技术52
第一节蛋白质分离与纯化52
第二节蛋白质定量56
第三节蛋白质免疫印迹61
第四节流式细胞分析技术64
第五节免疫共沉淀67
第四章基因功能研究相关技术71
第一节基因表达与调节71
第二节转基因技术78
第三节基因敲除81
第四节基因沉默84
第五章细胞研究技术88
第一节细胞培养88
第二节细胞凋亡的检测91
第二篇分子生物学实验
第六章DNA操作实验95
实验一质粒DNA的微量快速提取95
实验二外周血白细胞DNA的微量快速提取(离心柱法)97
实验三质粒DNA的酶切与鉴定98
实验四聚合酶链反应技术(PCR)100
实验五DNA序列测定(双脱氧测序银染法)101
实验六DNA印迹杂交技术(Southern印迹法)106
实验七DNA重组与鉴定110
实验八克隆化DNA的定点突变实验113
第七章RNA操作实验116
实验一肝总RNA的制备116
实验二Northern印迹法118
实验三利用RT-PCR对大鼠肝组织SOD基因进行半定量分析121
实验四实时荧光定量PCR(法)检测大鼠不同组织中碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因表达水平的差异123
实验五cDNA文库构建128
第八章蛋白质研究相关实验134
实验一血清γ-球蛋白的分离纯化与鉴定134
实验二肝组织蛋白质定量136
实验三小鼠肝β-actin蛋白免疫印迹检测140
实验四免疫组织化学144
实验五免疫荧光染色方法146
实验六流式细胞仪对血小板活化的测定148
实验七免疫共沉淀151
第九章基因表达与调节实验154
实验一利用荧光素酶报告基因系统检测启动子的转录活性154
实验二染色质免疫沉淀技术156
实验三DNA甲基化特异性PCR158
实验四Red同源重组技术对大肠埃希菌ClpP基因的敲除162
实验五siRNA技术沉默基因163
实验六microRNA技术沉默基因165
第十章转基因实验168
实验一绿色荧光蛋白基因真核表达载体的构建及其在酿酒酵母中的表达168
实验二原核表达载体构建173
实验三哺乳动物细胞的转染178
实验四用电穿孔方法将重组质粒转化细菌179
实验五克隆化基因在大肠埃希菌的诱导表达180
实验六转基因动物的建立181
第十一章细胞研究实验185
实验一小鼠原代细胞培养185
实验二细胞培养实验186
实验三细胞凋亡检测187
第三篇分子生物学软件应用
第十二章PCR引物设计及相关软件使用190
第十三章核酸序列分析与预测203
第一节核酸序列分析一般内容203
第二节miRNA序列数据库及靶点预测219
第十四章蛋白质序列分析与结构预测225
第一节蛋白质序列分析225
第二节二级结构及三级结构预测234
第十五章科研论文中的图片处理240
第一节基本概念240
第二节图片的获取与保存241
第三节图片的修复、编排与标注242
第四节图片的制作规范242
第五节结语242
第十六章EndNote软件的安装及其在医学文献管理和科研写作中的应用243
第一节EndNoteⅩ7的安装243
第二节EndNoteⅩ7的简介245
第三节EndNoteⅩ7的使用247
参考文献259
附录260
附录1分子生物学实验室常用设备介绍260
附录2分子生物学及基因工程常用试剂276